配套试剂：Perfusate I、Perfusate II、Culture Medium、Purification Solution（Percoll体系）。
必备耗材：蠕动泵、恒温水浴锅、手术器械、培养皿、离心管、无菌注射器、70μm无菌滤网。
全程在超净台进行无菌操作，所有试剂需提前预热至37℃。

选用6–8周龄健康小鼠，实验前禁食12小时（不禁水），减少肝内糖原储备，提升细胞代谢活性。

关键提示：灌流全程需避免气泡产生，气泡会导致肝组织局部坏死，大幅降低细胞得率。

小鼠肝原代提取流程图

门静脉插入灌流针，启动蠕动泵（流速3–4 mL/min），剪开胸腔下腔静脉作为流出道。灌流至肝脏完全变为土黄色（约5–8分钟）。

切换为含优化消化酶的Perfusate II，保持同等流速灌流8–12分钟。肝脏明显膨松、包膜起皱、质地变软时停止。

完整取下肝脏，剔除胆囊及结缔组织→剪碎→加培养液轻柔吹打→过70μm无菌滤网→500rpm离心3分钟→Percoll密度梯度离心（1500rpm，10min，4℃）→吸取目标细胞层→洗涤重悬。

台盼蓝染色计数，合格活率应≥85%。按1×10⁶个/mL接种，置于37℃、5% CO₂培养箱。静置培养4–6小时后换液。

培养0h：圆球形、折光极强、完全不贴壁。
培养6h：多边形鹅卵石形态、胞质透亮、可见双核。